液相色譜熒光檢測器(FLD)是一種高靈敏度、高選擇性的檢測器,適用于能產生熒光的化合物或經衍生化后發光的物質。其核心優勢在于靈敏度可達紫外檢測器的很多倍,且抗干擾能力強。
熒光檢測器的工作機制基于光致發光現象,核心步驟如下:
激發光照射光源(常用氙燈、汞燈或激光二極管)發射特定波長的激發光,通過單色器(光柵或濾光片)篩選出單一波長的激發光束,聚焦于色譜柱的流出液(檢測池)中。當待測組分分子吸收激發光能量后,會從基態(穩定態)躍遷到激發態(高能態)。
熒光發射處于激發態的分子不穩定,會在很短時間內(10??~10??秒)通過非輻射躍遷損失部分能量,回到激發態的*低振動能級,再通過輻射躍遷釋放出光子,回到基態,這個過程產生的光就是熒光。熒光的波長總是大于激發光波長(斯托克斯位移),這是熒光檢測的關鍵特征。
信號采集與轉換為了避免激發光的干擾,檢測器的熒光接收系統(光電倍增管 PMT 或光電二極管)通常與激發光光路呈 90° 角 放置。發射的熒光經單色器篩選出特征熒光波長后,被光電檢測器接收并轉換為電信號。電信號強度與待測組分的濃度在一定范圍內呈線性關系,后經放大和數據處理,得到色譜峰和定量結果。
檢測流程:
激發光源(如氙燈或激光)發出連續光譜,經單色器分光后選擇特定波長作為激發光。
激發光照射樣品池中的熒光物質,產生熒光。
熒光信號通過直角方向的光路(避免激發光干擾)被光敏元件(如光電倍增管)檢測,并轉換為電信號。
電信號經放大后傳輸至數據處理系統,生成色譜圖。
液相色譜熒光檢測器以其高靈敏度和高選擇性成為痕量分析的重要工具,尤其適用于生物、環境等領域。然而,其非通用性和對干擾的敏感性限制了應用范圍。通過結合激光光源、聯用技術或衍生化方法,可進一步拓展其分析能力,滿足復雜樣品檢測需求。