液相色譜流動相使用前為什么要脫氣？脫氣有什么作用？如何脫氣？脫氣不足可能造成哪些異常現(xiàn)象？

（1）脫氣的必要性：

a.氣泡會增加基線的噪聲，造成靈敏度下降，甚至無法分析（噪聲增大，基線不穩(wěn)，突然跳動）。

b.溶解的氧氣還會導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，溶解的氧氣與色譜柱中固定相（如烷基胺）發(fā)生反應(yīng)，柱效降低從而改變柱的分離性能。

c.溶解氧能與某些溶劑（如甲醇、四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡(luò)合物，絡(luò)合物會提高背景吸收（特別是在260nm以下），并導(dǎo)致檢測靈敏度的輕微降低，會在梯度淋洗時造成基線漂移或形成鬼峰（假峰）。

d.若用FLD（熒光檢測器），溶解氧在一定條件下還會引起淬滅現(xiàn)象，特別是對芳香烴、脂肪醛、酮等。在某些情況下，熒光響應(yīng)可降低達(dá)95%。

（2）脫氣的作用：

a.除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當(dāng)流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。

b.排出氣泡能減少泵工作的傷害，提高檢測器的性能高，改善靈敏度。

（3）脫氣的方式：

a.加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染，同時需要考慮低沸點溶劑揮發(fā)造成的組成變化。

b.抽真空脫氣法：缺點是易抽走有機相。

c.超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中（一般500mL溶液需超聲20~30min），此法不影響溶劑組成。超聲時應(yīng)注意避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸，以免玻璃瓶破裂，容器內(nèi)液面不要高出水面太多。

d.氦氣脫氣法：在色譜操作前和進行時，將惰性氣體噴入溶劑中。嚴(yán)格來說，此方法不能將溶劑脫氣，它只是用一種低溶解度的惰性氣體（通常是氦）將空氣替換出來。主要利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。

e.在線真空脫氣法：利用在線脫氣機在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。